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动物基因工程疫苗原理与方法

作者: 童光志著 , 王云峰著

出版社: 化学工业出版社

出版时间: 2009-05

版次: 1

ISBN: 9787122048240

定价: 85.00

装帧: 平装

开本: 16开

纸张: 胶版纸

页数: 408页

字数: 652千字

正文语种: 简体中文

丛书: “十一五”国家重点图书·华夏英才基金学术文库

分类: 自然科学

23人买过

　　《动物基因工程疫苗原理与方法》专著受华夏英才基金资助出版，为“十一五”国家重点图书。书中论述了基因工程疫苗领域的最新研制成果及正在研制开发的基因工程疫苗，包括亚单位疫苗、转基因植物疫苗、病毒基因缺失疫苗、病毒活载体疫苗、细菌性载体疫苗、核酸疫苗等。详细介绍了动物基因工程疫苗设计的原则、基因工程疫苗原理与方法、免疫效果评价等方面内容。在介绍基础理论的同时，强调技术实用性，内容系统全面。
　　《动物基因工程疫苗原理与方法》适合高校生物工程、生物制药、动物医学、生物技术等专业师生及科研人员阅读参考，并且是生物制药企业开发新型疫苗的良好指导用书。　　童光志，博士，研究员，博士生导师。1962年10月出生于湖北省蕲春县。曾担任哈尔滨市政协常委、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所副所长、兽医生物技术国家重点实验室主任、中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术分会理事长等职务。现为中国农业科学院上海兽医研究所所长，国务院政府特殊津贴获得者，首批入选“百千万人才工程”和农业部“神农计划”提名人，中国农业科学院跨世纪学术带头人，农业部有突出贡献中青年专家，首届全国优秀农业科技工作者，973“动物重大传染病病原变异与致病的分子机制”项目首席科学家，863计划生物与现代农业领域基因操作主题专家组成员。多年来一直从事动物病毒分子生物学与基因工程研究工作。曾获国家科技进步奖、国家发明奖、黑龙江省自然科学奖、省部级科技进步奖等奖项10项。
　　王云峰，博士，研究员，博士生导师。1967年3月出生于江苏省东台县。现任兽医生物技术国家重点实验室副主任、中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术分会秘书长。“新世纪百千万人才国家级人选”、黑龙江省优秀中青年专家。多年来从事畜禽病毒载体疫苗的研究工作。曾获国家科技进步奖、国家发明奖、省部级科技进步奖等奖项6项。第1章疫苗的历史、发展和前景1
1．1疫苗概念的产生及其历史1
1．2疫苗的应用及其效果分析3
1．3疫苗研究新技术的发展6
1．3．1传统疫苗7
1．3．2基因工程疫苗7
1．4疫苗对消灭和控制动物传染病的发展前景8
参考文献8

第2章疫苗免疫学基本理论9
2．1疫苗相关免疫学基础9
2．1．1免疫系统9
2．1．2免疫器官9
2．1．3免疫细胞11
2．1．4抗原13
2．1．5抗体15
2．1．6免疫球蛋白的基本结构和功能16
2．2免疫应答的基本过程17
2．2．1非特异性免疫应答17
2．2．2特异性免疫应答19
2．3疫苗有效免疫反应的基本要素22
2．3．1抗原方面的因素22
2．3．2机体方面的因素22
2．3．3免疫方法的影响23
2．4疫苗免疫的主动免疫反应23
2．4．1抗原提呈23
2．4．2抗原竞争24
2．4．3体液免疫和细胞免疫反应的动态变化25
2．4．4免疫反应的调节25
2．4．5免疫记忆和免疫促进效应26
2．4．6全身性免疫、局部免疫和初乳免疫27
2．4．7被动免疫28
参考文献28

第3章疫苗佐剂30
3．1疫苗佐剂的作用机理30
3．1．1调节免疫30
3．1．2提呈抗原31
3．1．3细胞毒性T细胞应答31
3．1．4储存作用32
3．2植物佐剂32
3．2．1皂苷类32
3．2．2免疫刺激复合物佐剂32
3．2．3蜂胶佐剂33
3．2．4香菇多糖34
3．2．5云芝多糖34
3．2．6黄芪多糖34
3．3细菌佐剂35
3．3．1脂多糖35
3．3．2胞壁酰二肽及其衍生物35
3．3．3霍乱毒素35
3．3．4大肠杆菌不耐热肠毒素36
3．3．5百日咳毒素36
3．3．6短小棒状杆菌36
3．3．7卡介苗37
3．3．8单磷酰脂质A37
3．4矿物油佐剂37
3．4．1油乳剂37
3．4．2MF59佐剂37
3．5矿物盐佐剂38
3．5．1铝佐剂（铝胶）38
3．5．2磷酸钙佐剂39
3．5．3氢氧化铁凝胶佐剂40
3．5．4硒40
3．6细胞因子佐剂40
3．6．1白细胞介素141
3．6．2白细胞介素241
3．6．3白细胞介素1241
3．6．4粒细胞巨噬细胞集落刺激因子41
3．6．5干扰素42
3．6．6其他细胞因子42
3．7核酸佐剂43
3．7．1免疫刺激序列（CpG基序）43
3．7．2表达与免疫相关的细胞因子的核酸载体46
3．7．3双链RNA46
3．8投递系统47
3．9新佐剂的选择和研究方向47
参考文献49

第4章疫苗设计的技术基础51
4．1经典疫苗及新型疫苗的技术特点51
4．1．1经典疫苗的技术要点51
4．1．2新型疫苗的特点52
4．2当前疫苗研究的趋势52
4．2．1新型疫苗的分子设计52
4．2．2新型疫苗的规模化生产53
4．2．3开发配套的鉴别诊断技术53
4．2．4新型佐剂的使用53
4．2．5动物用生物制品工程研究中心建设53
4．3常规活疫苗的研发原则53
4．3．1病原自然弱毒株53
4．3．2异源免疫53
4．3．3异源动物或细胞传代致弱54
4．3．4改变体外培养传代环境54
4．4基因工程疫苗及其研发原则54
4．4．1亚单位疫苗及其研发原则54
4．4．2基因缺失疫苗及其研发原则55
4．4．3活载体疫苗及其研发原则55
4．4．4核酸疫苗及其研发原则56
4．4．5合成多肽疫苗及其研发原则58
4．4．6T细胞疫苗60
4．5基因工程疫苗设计中优化基因表达的关键因素61
4．5．1密码子最佳化61
4．5．2翻译终止效率62
4．5．3真核细胞中的异源蛋白表达62
4．6计算机辅助疫苗设计技术63
4．6．1计算机辅助疫苗设计技术的原理与方法63
4．6．2计算机辅助疫苗设计技术的应用与常用工具64
4．6．3计算机辅助疫苗设计的产业前景65
4．7利用免疫蛋白质组学方法筛选高效疫苗65
4．7．1免疫蛋白质组学65
4．7．2免疫蛋白质组学的技术体系66
4．7．3免疫蛋白质组学在疫苗候选靶位筛选中的应用67
4．7．4展望67
参考文献68

第5章疫苗效果的免疫学评价69
5．1疫苗开发的原则与开发步骤69
5．2疫苗效果免疫学评价的一般原则69
5．2．1方法69
5．2．2安全性70
5．2．3免疫效果70
5．2．4保护效果70
5．2．5流行病学评价70
5．3疫苗效果的免疫学评价方法70
5．3．1疫苗免疫效果的实验室评估70
5．3．2疫苗免疫效果的临床评估73
5．4疫苗效果的流行病学评价74
5．4．1传染病的流行与疫苗的作用策略74
5．4．2传染病的流行及其流行病学特征74
5．4．3疫苗在控制传染病流行中的作用76
5．4．4疫苗的免疫策略76
5．4．5疫苗效果的流行病学指标77
5．4．6疫苗效果调查的流行病学设计78
参考文献79

第6章基因工程疫苗概述81
6．1基因工程疫苗的概念81
6．2基因工程亚单位疫苗82
6．2．1细菌性疾病亚单位疫苗82
6．2．2病毒性疾病亚单位疫苗83
6．2．3激素亚单位疫苗83
6．3基因突变疫苗及基因缺失疫苗83
6．4基因工程活载体疫苗84
6．4．1复制性活载体疫苗84
6．4．2非复制性载体疫苗85
6．5核酸疫苗85
6．6转基因植物可食疫苗85
6．7合成肽疫苗86
6．8抗独特型疫苗87
6．9畜禽基因工程疫苗产业发展现状与前景87
6．9．1国际畜禽基因工程疫苗产业化现状88
6．9．2国内畜禽基因工程疫苗产业化现状88
6．9．321世纪面临的机遇、挑战和策略89
参考文献90

第7章基因工程亚单位疫苗92
7．1基因工程亚单位疫苗的种类92
7．2基因工程亚单位疫苗抗原基因的选择93
7．3基因工程亚单位疫苗的抗原表达系统93
7．3．1原核表达系统93
7．3．2酵母表达系统96
7．3．3昆虫细胞表达系统101
7．3．4哺乳动物细胞表达系统104
7．4外源蛋白表达操作案例110
7．4．1原核表达外源蛋白110
7．4．2毕赤酵母表达外源蛋白111
7．4．3昆虫细胞（BactoBac系统）表达外源蛋白114
7．4．4脂质体法转染真核细胞115
7．5亚单位疫苗研究与应用115
7．5．1原核表达系统在亚单位疫苗研究中的应用115
7．5．2真核表达系统在亚单位疫苗研究中的应用116
7．6展望117
参考文献117

第8章转基因植物疫苗119
8．1植物生物反应器生产可食用疫苗研究进展120
8．1．1可食用疫苗的表达系统120
8．1．2可食用疫苗的可行性121
8．2转基因植物疫苗的载体系统123
8．2．1外源基因转移的植物病毒载体123
8．2．2外源基因转移的质粒载体125
8．2．3载体卡盒130
8．2．4载体构建中常用的选择标记基因及报告基因131
8．2．5外源基因的转化方法135
8．2．6转入基因的状况和表达以及基因沉默145
8．3转基因植物疫苗的植物受体系统148
8．3．1植物基因转化受体系统的类型及其特性148
8．3．2植物基因转化受体系统建立的程序149
8．3．3植物基因转化受体系统建立中常遇的问题152
8．4转基因植物操作案例153
8．4．1根癌农杆菌介导的基因转化方法153
8．4．2发根农杆菌介导的植物转化161
8．4．3基因枪轰击法（瞬时表达）163
8．5转基因植物疫苗存在的问题与对策163
8．5．1受体植物不理想164
8．5．2重组抗原蛋白表达量低164
8．5．3转基因植物疫苗的免疫原性弱164
8．5．4安全性问题165
8．5．5植物大量表达外源基因时出现长势弱的现象165
8．5．6口服时抗原的消化降解165
8．5．7重组蛋白的提纯165
8．5．8免疫耐受165
8．6展望166
参考文献166

第9章病毒基因缺失疫苗169
9．1基因缺失疫苗研究概况169
9．2畜禽基因缺失疫苗制备原理与技术171
9．2．1疱疹病毒基因缺失疫苗的制备原理和方法171
9．2．2反转录病毒基因缺失疫苗的制备原理与方法175
9．2．3RNA病毒基因缺失疫苗的制备原理与方法175
9．3畜禽基因缺失疫苗的研究与应用现状180
9．3．1伪狂犬病基因缺失疫苗的研究180
9．3．2牛传染性鼻气管炎基因缺失疫苗的研究180
9．3．3马疱疹病毒基因缺失疫苗的研究181
9．3．4反转录病毒基因缺失疫苗的研究181
9．3．5RNA病毒基因缺失疫苗的研究181
9．3．6畜禽基因缺失疫苗的应用现状182
9．4畜禽基因缺失疫苗的展望182
参考文献183

第10章病毒活载体疫苗186
10．1重组病毒活载体疫苗的技术特点186
10．2重组活载体疫苗的设计原则187
10．2．1抗原的选择187
10．2．2活载体的选择187
10．2．3转移载体的构建188
10．2．4外源基因插入位点的选择188
10．3痘病毒载体疫苗188
10．3．1痘病毒的分子生物学189
10．3．2痘苗病毒载体疫苗190
10．3．3禽痘病毒载体疫苗195
10．4疱疹病毒载体209
10．4．1伪狂犬病病毒载体疫苗209
10．4．21型牛疱疹病毒载体疫苗217
10．4．3马立克病病毒载体218
10．5腺病毒223
10．5．1腺病毒载体的概述223
10．5．2腺病毒载体的构建225
10．5．3改进腺病毒载体的方法231
10．5．4展望234
10．6反转录病毒235
10．6．1反转录病毒概述235
10．6．2反转录病毒载体的包装原理235
10．6．3反转录病毒载体的分类236
10．6．4反转录病毒载体的构建238
10．6．5反转录病毒的优缺点238
10．6．6近年来反转录病毒载体的改进239
10．6．7展望240
10．7甲病毒RNA复制子疫苗241
10．7．1基本原理和特点241
10．7．2甲病毒复制子疫苗的优缺点242
10．7．3甲病毒复制子疫苗的免疫机理242
10．7．4几种主要的甲病毒RNA复制子243
10．7．5甲病毒表达载体构建策略246
10．8重组活载体疫苗的局限性247
10．8．1安全性247
10．8．2母源性抗体干扰248
10．8．3重组病毒的表达量249
10．8．4病原性及免疫效力249
10．9重组病毒活载体疫苗的发展方向249
参考文献251

第11章细菌性载体疫苗256
11．1沙门菌载体256
11．1．1鼠伤寒沙门菌菌株特征257
11．1．2鼠伤寒沙门菌减毒株的构建原理257
11．1．3重组减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建及其免疫机制257
11．1．4重组鼠伤寒沙门菌株的构建方法261
11．1．5结语264
11．2重组BCG载体265
11．2．1重组BCG载体的优点265
11．2．2重组BCG载体的研究进展265
11．2．3rBCG诱导的免疫应答及免疫途径对免疫效果的影响268
11．2．4rBCG存在的一些问题269
11．2．5重组卡介苗菌株的构建方法269
11．2．6展望273
11．3乳酸菌（乳酸杆菌和乳酸乳球菌）载体273
11．3．1乳酸杆菌载体274
11．3．2乳酸乳球菌279
11．4弧菌载体疫苗282
11．4．1弧菌载体282
11．4．2适用减毒弧菌的表达系统283
11．4．3平衡致死质粒的保持283
11．4．4对细菌载体应用的更多考虑284
11．5志贺菌载体疫苗285
11．5．1志贺菌载体285
11．5．2志贺菌传递质粒DNA285
11．6李斯特菌载体285
11．6．1李斯特菌疫苗286
11．6．2李斯特菌载体286
11．6．3减毒李斯特菌在肿瘤治疗中的应用286
11．6．4李斯特菌传递质粒DNA287
11．7枯草芽孢杆菌整合载体287
11．7．1芽孢杆菌整合载体的研究历程287
11．7．2枯草芽孢杆菌整合载体的整合机理及方式288
11．7．3枯草芽孢杆菌整合载体疫苗的构建289
11．7．4芽孢杆菌整合载体的应用291
参考文献291

第12章核酸疫苗294
12．1DNA疫苗的特点295
12．1．1DNA疫苗的主要优点295
12．1．2DNA疫苗的局限性297
12．2DNA疫苗的免疫应答机制298
12．2．1从诱导产生的免疫应答类型方面来探讨DNA免疫机制299
12．2．2从接种途径方面来探讨DNA免疫的机制301
12．3DNA疫苗的构建与评价303
12．3．1选择合适的目的基因和载体304
12．3．2DNA疫苗的构建305
12．3．3提高抗原蛋白表达量和免疫原性305
12．3．4验证抗原蛋白的表达情况306
12．3．5DNA疫苗的免疫学效果评价306
12．3．6安全性分析307
12．4提高DNA疫苗免疫效果的策略307
12．4．1编码抗原的目的基因的改造307
12．4．2疫苗质粒载体的选择和优化308
12．4．3基因佐剂309
12．4．4免疫途径和免疫方法315
12．4．5DNA疫苗免疫方式的改进317
12．4．6DNA疫苗的靶向策略318
12．4．7接种方案321
12．4．8疫苗剂型的改进322
12．5DNA疫苗在畜禽疾病控制中的应用研究与发展趋势323
12．5．1禽的相关DNA疫苗323
12．5．2猪的相关DNA疫苗325
12．5．3牛的相关DNA疫苗326
12．5．4犬的相关DNA疫苗327
12．5．5细菌病的DNA疫苗327
12．5．6寄生虫病的DNA疫苗328
12．6DNA疫苗的安全性问题329
12．6．1重组质粒能否整合到宿主细胞基因组中导致原癌基因的激活或抑癌基因的抑制329
12．6．2重组质粒能否诱导自身免疫反应,产生抗DNA抗体330
12．6．3重组质粒持续表达外源抗原能否产生不良后果330
12．6．4重组质粒能否具有生殖毒性331
12．6．5重组质粒与细胞因子合用能否导致其他风险331
12．6．6DNA疫苗标准化的问题331
12．6．7风险与效率比332
12．7结语332
参考文献333

第13章A型流感病毒反向遗传学操作技术及其在疫苗研制过程中的应用336
13．1流感病毒的分子生物学336
13．1．1流感病毒的结构与编码蛋白的功能336
13．1．2流感病毒的复制339
13．2流感病毒反向遗传学技术的发展341
13．2．1借助辅助病毒拯救流感病毒341
13．2．2由克隆的基因拯救A型流感病毒341
13．3反向遗传学操作技术在流感病毒疫苗研究中的应用344
13．3．1弱毒流感疫苗株的拯救344
13．3．2病毒感染与疫苗免疫动物鉴别诊断344
13．4流感病毒8质粒系统实验操作方法345
13．4．1pHW2000双向转录载体345
13．4．2以pHW2000为载体的病毒拯救346
13．5展望347
参考文献348

第14章新城疫病毒的反向遗传操作及其在新型疫苗研制中的应用349
14．1RNA病毒的反向遗传操作349
14．1．1概述349
14．1．2感染性分子克隆的构建350
14．1．3感染性分子克隆的体外操作352
14．1．4结语353
14．2新城疫病毒概述353
14．2．1新城疫病毒的生物学特性354
14．2．2新城疫病毒的分子生物学特性357
14．2．3新城疫的诊断、免疫与防制361
14．3新城疫病毒的反向遗传操作技术原理及操作363
14．3．1分子水平构建cDNA等元件364
14．3．2拯救过程365
14．3．3验证分析366
14．3．4操作过程的注意事项367
14．4反向遗传操作技术在新城疫病毒中的应用367
14．4．1研究结构和功能的关系367
14．4．2插入报告基因的重组病毒371
14．4．3标记疫苗/嵌合疫苗372
14．4．4禽用载体疫苗373
14．4．5用于人类传染病预防的疫苗载体374
14．4．6载体修饰用于肿瘤的治疗376
14．4．7结语378
参考文献378

第15章细菌人工染色体技术及其在新型疫苗研制中的应用382
15．1细菌人工染色体技术的产生382
15．2细菌人工染色体的结构功能及其遗传特性383
15．3细菌人工染色体的构建策略及构建方法384
15．3．1细菌人工染色体的构建策略384
15．3．2细菌人工染色体的构建方法385
15．4细菌人工染色体的构建操作案例387
15．4．1材料387
15．4．2重组鸡马立克病病毒转移载体的构建387
15．4．3重组鸡马立克病病毒的获得389
15．4．4电转化感受态细胞DH10B的制备389
15．4．5BAC分子克隆化病毒的筛选389
15．4．6BACDNA拯救重组病毒生长特性的测定390
15．5细菌人工染色体作为疫苗的应用及探索390
15．6细菌人工染色体疫苗的修饰系统393
15．6．1Red/ET重组系统393
15．6．2Red/ET重组的机制394
15．7细菌人工染色体疫苗诱导机体免疫应答的机制397
15．8细菌人工染色体疫苗的优越性及其存在的不足398
15．8．1细菌人工染色体疫苗的优越性398
15．8．2细菌人工染色体疫苗存在的问题与对策398
15．9展望398
参考文献399

第16章联合免疫400
16．1概述400
16．2联合疫苗的历史和发展401
16．3传统的联合疫苗402
16．4新型的联合疫苗403
16．5联合疫苗的制造和使用405
16．6展望407
参考文献407
内容简介:
　　《动物基因工程疫苗原理与方法》专著受华夏英才基金资助出版，为“十一五”国家重点图书。书中论述了基因工程疫苗领域的最新研制成果及正在研制开发的基因工程疫苗，包括亚单位疫苗、转基因植物疫苗、病毒基因缺失疫苗、病毒活载体疫苗、细菌性载体疫苗、核酸疫苗等。详细介绍了动物基因工程疫苗设计的原则、基因工程疫苗原理与方法、免疫效果评价等方面内容。在介绍基础理论的同时，强调技术实用性，内容系统全面。
　　《动物基因工程疫苗原理与方法》适合高校生物工程、生物制药、动物医学、生物技术等专业师生及科研人员阅读参考，并且是生物制药企业开发新型疫苗的良好指导用书。
作者简介:
　　童光志，博士，研究员，博士生导师。1962年10月出生于湖北省蕲春县。曾担任哈尔滨市政协常委、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所副所长、兽医生物技术国家重点实验室主任、中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术分会理事长等职务。现为中国农业科学院上海兽医研究所所长，国务院政府特殊津贴获得者，首批入选“百千万人才工程”和农业部“神农计划”提名人，中国农业科学院跨世纪学术带头人，农业部有突出贡献中青年专家，首届全国优秀农业科技工作者，973“动物重大传染病病原变异与致病的分子机制”项目首席科学家，863计划生物与现代农业领域基因操作主题专家组成员。多年来一直从事动物病毒分子生物学与基因工程研究工作。曾获国家科技进步奖、国家发明奖、黑龙江省自然科学奖、省部级科技进步奖等奖项10项。
　　王云峰，博士，研究员，博士生导师。1967年3月出生于江苏省东台县。现任兽医生物技术国家重点实验室副主任、中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术分会秘书长。“新世纪百千万人才国家级人选”、黑龙江省优秀中青年专家。多年来从事畜禽病毒载体疫苗的研究工作。曾获国家科技进步奖、国家发明奖、省部级科技进步奖等奖项6项。
目录:
第1章疫苗的历史、发展和前景1
1．1疫苗概念的产生及其历史1
1．2疫苗的应用及其效果分析3
1．3疫苗研究新技术的发展6
1．3．1传统疫苗7
1．3．2基因工程疫苗7
1．4疫苗对消灭和控制动物传染病的发展前景8
参考文献8

第2章疫苗免疫学基本理论9
2．1疫苗相关免疫学基础9
2．1．1免疫系统9
2．1．2免疫器官9
2．1．3免疫细胞11
2．1．4抗原13
2．1．5抗体15
2．1．6免疫球蛋白的基本结构和功能16
2．2免疫应答的基本过程17
2．2．1非特异性免疫应答17
2．2．2特异性免疫应答19
2．3疫苗有效免疫反应的基本要素22
2．3．1抗原方面的因素22
2．3．2机体方面的因素22
2．3．3免疫方法的影响23
2．4疫苗免疫的主动免疫反应23
2．4．1抗原提呈23
2．4．2抗原竞争24
2．4．3体液免疫和细胞免疫反应的动态变化25
2．4．4免疫反应的调节25
2．4．5免疫记忆和免疫促进效应26
2．4．6全身性免疫、局部免疫和初乳免疫27
2．4．7被动免疫28
参考文献28

第3章疫苗佐剂30
3．1疫苗佐剂的作用机理30
3．1．1调节免疫30
3．1．2提呈抗原31
3．1．3细胞毒性T细胞应答31
3．1．4储存作用32
3．2植物佐剂32
3．2．1皂苷类32
3．2．2免疫刺激复合物佐剂32
3．2．3蜂胶佐剂33
3．2．4香菇多糖34
3．2．5云芝多糖34
3．2．6黄芪多糖34
3．3细菌佐剂35
3．3．1脂多糖35
3．3．2胞壁酰二肽及其衍生物35
3．3．3霍乱毒素35
3．3．4大肠杆菌不耐热肠毒素36
3．3．5百日咳毒素36
3．3．6短小棒状杆菌36
3．3．7卡介苗37
3．3．8单磷酰脂质A37
3．4矿物油佐剂37
3．4．1油乳剂37
3．4．2MF59佐剂37
3．5矿物盐佐剂38
3．5．1铝佐剂（铝胶）38
3．5．2磷酸钙佐剂39
3．5．3氢氧化铁凝胶佐剂40
3．5．4硒40
3．6细胞因子佐剂40
3．6．1白细胞介素141
3．6．2白细胞介素241
3．6．3白细胞介素1241
3．6．4粒细胞巨噬细胞集落刺激因子41
3．6．5干扰素42
3．6．6其他细胞因子42
3．7核酸佐剂43
3．7．1免疫刺激序列（CpG基序）43
3．7．2表达与免疫相关的细胞因子的核酸载体46
3．7．3双链RNA46
3．8投递系统47
3．9新佐剂的选择和研究方向47
参考文献49

第4章疫苗设计的技术基础51
4．1经典疫苗及新型疫苗的技术特点51
4．1．1经典疫苗的技术要点51
4．1．2新型疫苗的特点52
4．2当前疫苗研究的趋势52
4．2．1新型疫苗的分子设计52
4．2．2新型疫苗的规模化生产53
4．2．3开发配套的鉴别诊断技术53
4．2．4新型佐剂的使用53
4．2．5动物用生物制品工程研究中心建设53
4．3常规活疫苗的研发原则53
4．3．1病原自然弱毒株53
4．3．2异源免疫53
4．3．3异源动物或细胞传代致弱54
4．3．4改变体外培养传代环境54
4．4基因工程疫苗及其研发原则54
4．4．1亚单位疫苗及其研发原则54
4．4．2基因缺失疫苗及其研发原则55
4．4．3活载体疫苗及其研发原则55
4．4．4核酸疫苗及其研发原则56
4．4．5合成多肽疫苗及其研发原则58
4．4．6T细胞疫苗60
4．5基因工程疫苗设计中优化基因表达的关键因素61
4．5．1密码子最佳化61
4．5．2翻译终止效率62
4．5．3真核细胞中的异源蛋白表达62
4．6计算机辅助疫苗设计技术63
4．6．1计算机辅助疫苗设计技术的原理与方法63
4．6．2计算机辅助疫苗设计技术的应用与常用工具64
4．6．3计算机辅助疫苗设计的产业前景65
4．7利用免疫蛋白质组学方法筛选高效疫苗65
4．7．1免疫蛋白质组学65
4．7．2免疫蛋白质组学的技术体系66
4．7．3免疫蛋白质组学在疫苗候选靶位筛选中的应用67
4．7．4展望67
参考文献68

第5章疫苗效果的免疫学评价69
5．1疫苗开发的原则与开发步骤69
5．2疫苗效果免疫学评价的一般原则69
5．2．1方法69
5．2．2安全性70
5．2．3免疫效果70
5．2．4保护效果70
5．2．5流行病学评价70
5．3疫苗效果的免疫学评价方法70
5．3．1疫苗免疫效果的实验室评估70
5．3．2疫苗免疫效果的临床评估73
5．4疫苗效果的流行病学评价74
5．4．1传染病的流行与疫苗的作用策略74
5．4．2传染病的流行及其流行病学特征74
5．4．3疫苗在控制传染病流行中的作用76
5．4．4疫苗的免疫策略76
5．4．5疫苗效果的流行病学指标77
5．4．6疫苗效果调查的流行病学设计78
参考文献79

第6章基因工程疫苗概述81
6．1基因工程疫苗的概念81
6．2基因工程亚单位疫苗82
6．2．1细菌性疾病亚单位疫苗82
6．2．2病毒性疾病亚单位疫苗83
6．2．3激素亚单位疫苗83
6．3基因突变疫苗及基因缺失疫苗83
6．4基因工程活载体疫苗84
6．4．1复制性活载体疫苗84
6．4．2非复制性载体疫苗85
6．5核酸疫苗85
6．6转基因植物可食疫苗85
6．7合成肽疫苗86
6．8抗独特型疫苗87
6．9畜禽基因工程疫苗产业发展现状与前景87
6．9．1国际畜禽基因工程疫苗产业化现状88
6．9．2国内畜禽基因工程疫苗产业化现状88
6．9．321世纪面临的机遇、挑战和策略89
参考文献90

第7章基因工程亚单位疫苗92
7．1基因工程亚单位疫苗的种类92
7．2基因工程亚单位疫苗抗原基因的选择93
7．3基因工程亚单位疫苗的抗原表达系统93
7．3．1原核表达系统93
7．3．2酵母表达系统96
7．3．3昆虫细胞表达系统101
7．3．4哺乳动物细胞表达系统104
7．4外源蛋白表达操作案例110
7．4．1原核表达外源蛋白110
7．4．2毕赤酵母表达外源蛋白111
7．4．3昆虫细胞（BactoBac系统）表达外源蛋白114
7．4．4脂质体法转染真核细胞115
7．5亚单位疫苗研究与应用115
7．5．1原核表达系统在亚单位疫苗研究中的应用115
7．5．2真核表达系统在亚单位疫苗研究中的应用116
7．6展望117
参考文献117

第8章转基因植物疫苗119
8．1植物生物反应器生产可食用疫苗研究进展120
8．1．1可食用疫苗的表达系统120
8．1．2可食用疫苗的可行性121
8．2转基因植物疫苗的载体系统123
8．2．1外源基因转移的植物病毒载体123
8．2．2外源基因转移的质粒载体125
8．2．3载体卡盒130
8．2．4载体构建中常用的选择标记基因及报告基因131
8．2．5外源基因的转化方法135
8．2．6转入基因的状况和表达以及基因沉默145
8．3转基因植物疫苗的植物受体系统148
8．3．1植物基因转化受体系统的类型及其特性148
8．3．2植物基因转化受体系统建立的程序149
8．3．3植物基因转化受体系统建立中常遇的问题152
8．4转基因植物操作案例153
8．4．1根癌农杆菌介导的基因转化方法153
8．4．2发根农杆菌介导的植物转化161
8．4．3基因枪轰击法（瞬时表达）163
8．5转基因植物疫苗存在的问题与对策163
8．5．1受体植物不理想164
8．5．2重组抗原蛋白表达量低164
8．5．3转基因植物疫苗的免疫原性弱164
8．5．4安全性问题165
8．5．5植物大量表达外源基因时出现长势弱的现象165
8．5．6口服时抗原的消化降解165
8．5．7重组蛋白的提纯165
8．5．8免疫耐受165
8．6展望166
参考文献166

第9章病毒基因缺失疫苗169
9．1基因缺失疫苗研究概况169
9．2畜禽基因缺失疫苗制备原理与技术171
9．2．1疱疹病毒基因缺失疫苗的制备原理和方法171
9．2．2反转录病毒基因缺失疫苗的制备原理与方法175
9．2．3RNA病毒基因缺失疫苗的制备原理与方法175
9．3畜禽基因缺失疫苗的研究与应用现状180
9．3．1伪狂犬病基因缺失疫苗的研究180
9．3．2牛传染性鼻气管炎基因缺失疫苗的研究180
9．3．3马疱疹病毒基因缺失疫苗的研究181
9．3．4反转录病毒基因缺失疫苗的研究181
9．3．5RNA病毒基因缺失疫苗的研究181
9．3．6畜禽基因缺失疫苗的应用现状182
9．4畜禽基因缺失疫苗的展望182
参考文献183

第10章病毒活载体疫苗186
10．1重组病毒活载体疫苗的技术特点186
10．2重组活载体疫苗的设计原则187
10．2．1抗原的选择187
10．2．2活载体的选择187
10．2．3转移载体的构建188
10．2．4外源基因插入位点的选择188
10．3痘病毒载体疫苗188
10．3．1痘病毒的分子生物学189
10．3．2痘苗病毒载体疫苗190
10．3．3禽痘病毒载体疫苗195
10．4疱疹病毒载体209
10．4．1伪狂犬病病毒载体疫苗209
10．4．21型牛疱疹病毒载体疫苗217
10．4．3马立克病病毒载体218
10．5腺病毒223
10．5．1腺病毒载体的概述223
10．5．2腺病毒载体的构建225
10．5．3改进腺病毒载体的方法231
10．5．4展望234
10．6反转录病毒235
10．6．1反转录病毒概述235
10．6．2反转录病毒载体的包装原理235
10．6．3反转录病毒载体的分类236
10．6．4反转录病毒载体的构建238
10．6．5反转录病毒的优缺点238
10．6．6近年来反转录病毒载体的改进239
10．6．7展望240
10．7甲病毒RNA复制子疫苗241
10．7．1基本原理和特点241
10．7．2甲病毒复制子疫苗的优缺点242
10．7．3甲病毒复制子疫苗的免疫机理242
10．7．4几种主要的甲病毒RNA复制子243
10．7．5甲病毒表达载体构建策略246
10．8重组活载体疫苗的局限性247
10．8．1安全性247
10．8．2母源性抗体干扰248
10．8．3重组病毒的表达量249
10．8．4病原性及免疫效力249
10．9重组病毒活载体疫苗的发展方向249
参考文献251

第11章细菌性载体疫苗256
11．1沙门菌载体256
11．1．1鼠伤寒沙门菌菌株特征257
11．1．2鼠伤寒沙门菌减毒株的构建原理257
11．1．3重组减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建及其免疫机制257
11．1．4重组鼠伤寒沙门菌株的构建方法261
11．1．5结语264
11．2重组BCG载体265
11．2．1重组BCG载体的优点265
11．2．2重组BCG载体的研究进展265
11．2．3rBCG诱导的免疫应答及免疫途径对免疫效果的影响268
11．2．4rBCG存在的一些问题269
11．2．5重组卡介苗菌株的构建方法269
11．2．6展望273
11．3乳酸菌（乳酸杆菌和乳酸乳球菌）载体273
11．3．1乳酸杆菌载体274
11．3．2乳酸乳球菌279
11．4弧菌载体疫苗282
11．4．1弧菌载体282
11．4．2适用减毒弧菌的表达系统283
11．4．3平衡致死质粒的保持283
11．4．4对细菌载体应用的更多考虑284
11．5志贺菌载体疫苗285
11．5．1志贺菌载体285
11．5．2志贺菌传递质粒DNA285
11．6李斯特菌载体285
11．6．1李斯特菌疫苗286
11．6．2李斯特菌载体286
11．6．3减毒李斯特菌在肿瘤治疗中的应用286
11．6．4李斯特菌传递质粒DNA287
11．7枯草芽孢杆菌整合载体287
11．7．1芽孢杆菌整合载体的研究历程287
11．7．2枯草芽孢杆菌整合载体的整合机理及方式288
11．7．3枯草芽孢杆菌整合载体疫苗的构建289
11．7．4芽孢杆菌整合载体的应用291
参考文献291

第12章核酸疫苗294
12．1DNA疫苗的特点295
12．1．1DNA疫苗的主要优点295
12．1．2DNA疫苗的局限性297
12．2DNA疫苗的免疫应答机制298
12．2．1从诱导产生的免疫应答类型方面来探讨DNA免疫机制299
12．2．2从接种途径方面来探讨DNA免疫的机制301
12．3DNA疫苗的构建与评价303
12．3．1选择合适的目的基因和载体304
12．3．2DNA疫苗的构建305
12．3．3提高抗原蛋白表达量和免疫原性305
12．3．4验证抗原蛋白的表达情况306
12．3．5DNA疫苗的免疫学效果评价306
12．3．6安全性分析307
12．4提高DNA疫苗免疫效果的策略307
12．4．1编码抗原的目的基因的改造307
12．4．2疫苗质粒载体的选择和优化308
12．4．3基因佐剂309
12．4．4免疫途径和免疫方法315
12．4．5DNA疫苗免疫方式的改进317
12．4．6DNA疫苗的靶向策略318
12．4．7接种方案321
12．4．8疫苗剂型的改进322
12．5DNA疫苗在畜禽疾病控制中的应用研究与发展趋势323
12．5．1禽的相关DNA疫苗323
12．5．2猪的相关DNA疫苗325
12．5．3牛的相关DNA疫苗326
12．5．4犬的相关DNA疫苗327
12．5．5细菌病的DNA疫苗327
12．5．6寄生虫病的DNA疫苗328
12．6DNA疫苗的安全性问题329
12．6．1重组质粒能否整合到宿主细胞基因组中导致原癌基因的激活或抑癌基因的抑制329
12．6．2重组质粒能否诱导自身免疫反应,产生抗DNA抗体330
12．6．3重组质粒持续表达外源抗原能否产生不良后果330
12．6．4重组质粒能否具有生殖毒性331
12．6．5重组质粒与细胞因子合用能否导致其他风险331
12．6．6DNA疫苗标准化的问题331
12．6．7风险与效率比332
12．7结语332
参考文献333

第13章A型流感病毒反向遗传学操作技术及其在疫苗研制过程中的应用336
13．1流感病毒的分子生物学336
13．1．1流感病毒的结构与编码蛋白的功能336
13．1．2流感病毒的复制339
13．2流感病毒反向遗传学技术的发展341
13．2．1借助辅助病毒拯救流感病毒341
13．2．2由克隆的基因拯救A型流感病毒341
13．3反向遗传学操作技术在流感病毒疫苗研究中的应用344
13．3．1弱毒流感疫苗株的拯救344
13．3．2病毒感染与疫苗免疫动物鉴别诊断344
13．4流感病毒8质粒系统实验操作方法345
13．4．1pHW2000双向转录载体345
13．4．2以pHW2000为载体的病毒拯救346
13．5展望347
参考文献348

第14章新城疫病毒的反向遗传操作及其在新型疫苗研制中的应用349
14．1RNA病毒的反向遗传操作349
14．1．1概述349
14．1．2感染性分子克隆的构建350
14．1．3感染性分子克隆的体外操作352
14．1．4结语353
14．2新城疫病毒概述353
14．2．1新城疫病毒的生物学特性354
14．2．2新城疫病毒的分子生物学特性357
14．2．3新城疫的诊断、免疫与防制361
14．3新城疫病毒的反向遗传操作技术原理及操作363
14．3．1分子水平构建cDNA等元件364
14．3．2拯救过程365
14．3．3验证分析366
14．3．4操作过程的注意事项367
14．4反向遗传操作技术在新城疫病毒中的应用367
14．4．1研究结构和功能的关系367
14．4．2插入报告基因的重组病毒371
14．4．3标记疫苗/嵌合疫苗372
14．4．4禽用载体疫苗373
14．4．5用于人类传染病预防的疫苗载体374
14．4．6载体修饰用于肿瘤的治疗376
14．4．7结语378
参考文献378

第15章细菌人工染色体技术及其在新型疫苗研制中的应用382
15．1细菌人工染色体技术的产生382
15．2细菌人工染色体的结构功能及其遗传特性383
15．3细菌人工染色体的构建策略及构建方法384
15．3．1细菌人工染色体的构建策略384
15．3．2细菌人工染色体的构建方法385
15．4细菌人工染色体的构建操作案例387
15．4．1材料387
15．4．2重组鸡马立克病病毒转移载体的构建387
15．4．3重组鸡马立克病病毒的获得389
15．4．4电转化感受态细胞DH10B的制备389
15．4．5BAC分子克隆化病毒的筛选389
15．4．6BACDNA拯救重组病毒生长特性的测定390
15．5细菌人工染色体作为疫苗的应用及探索390
15．6细菌人工染色体疫苗的修饰系统393
15．6．1Red/ET重组系统393
15．6．2Red/ET重组的机制394
15．7细菌人工染色体疫苗诱导机体免疫应答的机制397
15．8细菌人工染色体疫苗的优越性及其存在的不足398
15．8．1细菌人工染色体疫苗的优越性398
15．8．2细菌人工染色体疫苗存在的问题与对策398
15．9展望398
参考文献399

第16章联合免疫400
16．1概述400
16．2联合疫苗的历史和发展401
16．3传统的联合疫苗402
16．4新型的联合疫苗403
16．5联合疫苗的制造和使用405
16．6展望407
参考文献407

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动物基因工程疫苗原理与方法

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