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PCR聚合酶链反应

PCR聚合酶链反应

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作者: 刘森编

出版社: 化学工业出版社

出版时间: 2009-01

版次: 1

ISBN: 9787122031389

定价: 36.00

装帧: 平装

开本: 16开

纸张: 胶版纸

页数: 254页

字数: 304千字

正文语种: 简体中文

丛书: 药学实验室技术系列

分类: 自然科学

1 张插图图片

19人买过

　　《PCR聚合酶链反应》分为三篇，原理篇简要介绍PCR基本原理、技术发展及重要应用；操作方法／技术篇按照由简单到复杂的顺序，依次详细地介绍各种主流PCR技术在实际操作中的方法与技巧：常见问题解答篇采用一问一答的方式，根据编写人员的实践经验，对PCR技术中常见的问题进行详细解答。
　　内容涉及：
　　常规PCR
　　反转录PCR
　　实时荧光定量PCR
　　免疫PCR
　　利用PCR构建突变体
　　未知序列的克隆
　　其他常见PCR技术
　　PCR软件的使用
　　与同类书相比，《PCR聚合酶链反应》更加以实际经验为基础，突出实际操作技巧，采取Step-by-Step方式进行说明，使方法与技巧更易于掌握。
　　《PCR聚合酶链反应》适用于医药、生命科学相关实验室的技术人员及相关研究堂。原理篇
第1章PCR技术基本原理3
1.1基本原理3
1.2PCR反应动力学5
1.3PCR技术的特点6
1.4PCR反应体系的组成6
1.5PCR所需设备和器材9
参考文献9

第2章PCR技术的发展11
2.1PCR新技术的发展11
2.2其他核酸扩增技术的发展15
参考文献18

第3章PCR技术在医学研究领域中的应用19
3.1PCR在医学检验中的应用19
3.2对PCR技术医学应用的正确认识21
3.3PCR技术在医学应用中的管理22
参考文献23

操作方法/技术篇
第4章常规PCR27
4.1常规PCR反应体系说明27
4.2PCR操作27
4.3PCR条件优化48
参考文献55

第5章反转录PCR57
5.1RTPCR原理57
5.2RNA的提取和纯化60
5.3RTPCR的操作66
5.4衍生技术——基因表达系列分析82
参考文献85

第6章实时荧光定量PCR87
6.1原理87
6.2实验操作与优化89
6.3实时定量PCR数据分析93
6.4qPCR的常用软件——PrimerExpress99
6.5qPCR仪的选择107
参考文献112

第7章免疫PCR115
7.1原理115
7.2实验操作121
7.3条件优化125
参考文献128

第8章利用PCR构建突变体131
8.1定点突变131
8.2随机诱变PCR144
8.3衍生技术147
参考文献155

第9章未知序列的克隆157
9.1RNA连接酶介导的cDNA5′末端快速扩增157
9.2单侧特异性引物扩增未知DNA序列161
9.3反向PCR163
参考文献166

第10章其他医学领域常见PCR技术167
10.1PCR技术应用于病原微生物检测鉴定167
10.2遗传性疾病诊断的常用PCR技术175
10.3PCR技术在肿瘤方面的应用182
10.4甲基化特异性PCR186
参考文献193

第11章PCR软件使用195
11.1Oligo6的使用197
11.2PerlPrimer的使用206
11.3引物在线设计210

常见问题解答
1为什么完全没有PCR扩增产物？215
2为什么除目的条带外，还出现多条非特异扩增条带？215
3为什么目的条带未出现但有非特异扩增条带出现？216
4为什么PCR产物很少？216
5为什么同一批PCR反应中包括阴性对照在内的平行管出现相同的阳性结果？216
6为什么PCR产物出现片状拖带或涂抹带？216
7如何提高PCR的保真度？217
8如何减少PCR污染？217
9如何特异扩增极微量的目的基因片段？217
10如何确定最适退火温度？217
11如何进行长片段PCR扩增？218
12如何提高PCR的特异性？219
13RNA制备过程中如何避免RNase污染？219
14进行RNA相关实验时，塑料制品.玻璃和金属物品需要怎么处理？219
15什么时候需要分离mRNA?220
16如何判定分离的总RNA的纯度？220
17提取RNA时什么时候需要加入RNA载体?220
18如何除去纯化的RNA中微量的基因组DNA?220
19纯化的RNA样品如何保存？220
20组织和细胞样品如何收集和保存？220
21如何估计RNA的产量？220
22RNA制备过程中哪个环节要特别注意？221
23RTPCR要求模板RNA的260nm/280nm的值最低为多少，如果太低是不是会影响结果？221
24RTPCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？221
25如何选择RTPCR的方法？221
26RTPCR的常用内标猹瞐ctin和GAPDH的使用是否有选择性，比如不同的细胞.不同的刺激？221
27如何确定PCR的线性期？222
28引物的特异退火温度怎样设定？是否可以根据GC和AT含量算出？
是否可以用引物报告单上的Tm值？222
29PCR时20霯体系中cDNA应加多少比较合适？MgCl2应加多少？
各个成分的量有无确定标准？20霯是指体积还是量?222
30PCR结果进行电泳，actin有，但无其他目的条带，有几种原因？是否与cDNA的量少有关？Mg2+太多是否会抑制Taq酶的活性？223
31RTPCR的引物如何设计？223
32如何确认RNA的质量？224
33RTPCR中的定量如何控制？225
34RTPCR的实验设计需注意哪些事项？225
35RTPCR结果可以代替蛋白表达的结果吗？226
36DNA残留是否会影响RTPCR？226
37RTPCR定量测定中产物长度是否有限制？226
38RTPCR中内参照的意义是什么？226
39RTPCR中应选择什么作为内参照？226
40RTPCR定量实验中的凝胶成像要注意什么？226
41提取RNA时沉淀RNA步骤要注意什么？227
42RNA的保存要注意什么？227
43从临床样品中提取RNA有哪些注意事项？227
44PCR基因诱变的意义是什么？227
45定点突变时，转化率低或仅能得到很少菌落怎么办？227
46怎么解决定点突变中低突变率的问题？228
47如何避免PCR定点诱变中出现的假阳性问题？228
48怎样控制PCR随机基因突变的突变率？228
49在随机突变PCR后，看不到目的DNA产物条带怎么办？228
50QFPCR实验中无CT值（信号）出现是什么原因?229
51QFPCR中CT值出现过晚是什么原因？229
52QFPCR中标准曲线的线性关系不佳是什么原因?229
53QFPCR中阴性对照也出现明显的扩增是什么原因?230
54QFPCR中熔解曲线不止一个主峰是什么原因?230
55QFPCR中扩增效率低是什么原因?230
56QFPCR中实验重复性不好是什么原因?230
57如何知道QFPCR中变性温度是否合适?230
58QFPCR中如何选择变性时间?230
59QFPCR中如何知道退火温度和时间是否合适?231
60QFPCR中应该在哪一步读取荧光信号?231
61与常规的5′RACE相比，RMLRACE有什么特点?231
62IPCR的主要用途是什么?231
63PCRSSCP实验中有哪些注意事项？232
64如何优化多重PCR反应？233
65原位PCR要注意哪些问题？234
66PCR测序实验要注意哪些事项？236
67MSP与常规PCR有何不同？236
68为何有些组织DNA样品在MSP中同时出现甲基化和非甲基化两种结果？236
69MSP中如何设置对照？236
70采用软件设计的引物是否一定比自己根据经验设计的引物好？237

附录
附录1临床基因扩增检验实验室管理暂行办法241
附录2临床基因扩增检验实验室基本设置标准245
附录3临床基因扩增检验实验室工作规范247
内容简介:
　　《PCR聚合酶链反应》分为三篇，原理篇简要介绍PCR基本原理、技术发展及重要应用；操作方法／技术篇按照由简单到复杂的顺序，依次详细地介绍各种主流PCR技术在实际操作中的方法与技巧：常见问题解答篇采用一问一答的方式，根据编写人员的实践经验，对PCR技术中常见的问题进行详细解答。
　　内容涉及：
　　常规PCR
　　反转录PCR
　　实时荧光定量PCR
　　免疫PCR
　　利用PCR构建突变体
　　未知序列的克隆
　　其他常见PCR技术
　　PCR软件的使用
　　与同类书相比，《PCR聚合酶链反应》更加以实际经验为基础，突出实际操作技巧，采取Step-by-Step方式进行说明，使方法与技巧更易于掌握。
　　《PCR聚合酶链反应》适用于医药、生命科学相关实验室的技术人员及相关研究堂。
目录:
原理篇
第1章PCR技术基本原理3
1.1基本原理3
1.2PCR反应动力学5
1.3PCR技术的特点6
1.4PCR反应体系的组成6
1.5PCR所需设备和器材9
参考文献9

第2章PCR技术的发展11
2.1PCR新技术的发展11
2.2其他核酸扩增技术的发展15
参考文献18

第3章PCR技术在医学研究领域中的应用19
3.1PCR在医学检验中的应用19
3.2对PCR技术医学应用的正确认识21
3.3PCR技术在医学应用中的管理22
参考文献23

操作方法/技术篇
第4章常规PCR27
4.1常规PCR反应体系说明27
4.2PCR操作27
4.3PCR条件优化48
参考文献55

第5章反转录PCR57
5.1RTPCR原理57
5.2RNA的提取和纯化60
5.3RTPCR的操作66
5.4衍生技术——基因表达系列分析82
参考文献85

第6章实时荧光定量PCR87
6.1原理87
6.2实验操作与优化89
6.3实时定量PCR数据分析93
6.4qPCR的常用软件——PrimerExpress99
6.5qPCR仪的选择107
参考文献112

第7章免疫PCR115
7.1原理115
7.2实验操作121
7.3条件优化125
参考文献128

第8章利用PCR构建突变体131
8.1定点突变131
8.2随机诱变PCR144
8.3衍生技术147
参考文献155

第9章未知序列的克隆157
9.1RNA连接酶介导的cDNA5′末端快速扩增157
9.2单侧特异性引物扩增未知DNA序列161
9.3反向PCR163
参考文献166

第10章其他医学领域常见PCR技术167
10.1PCR技术应用于病原微生物检测鉴定167
10.2遗传性疾病诊断的常用PCR技术175
10.3PCR技术在肿瘤方面的应用182
10.4甲基化特异性PCR186
参考文献193

第11章PCR软件使用195
11.1Oligo6的使用197
11.2PerlPrimer的使用206
11.3引物在线设计210

常见问题解答
1为什么完全没有PCR扩增产物？215
2为什么除目的条带外，还出现多条非特异扩增条带？215
3为什么目的条带未出现但有非特异扩增条带出现？216
4为什么PCR产物很少？216
5为什么同一批PCR反应中包括阴性对照在内的平行管出现相同的阳性结果？216
6为什么PCR产物出现片状拖带或涂抹带？216
7如何提高PCR的保真度？217
8如何减少PCR污染？217
9如何特异扩增极微量的目的基因片段？217
10如何确定最适退火温度？217
11如何进行长片段PCR扩增？218
12如何提高PCR的特异性？219
13RNA制备过程中如何避免RNase污染？219
14进行RNA相关实验时，塑料制品.玻璃和金属物品需要怎么处理？219
15什么时候需要分离mRNA?220
16如何判定分离的总RNA的纯度？220
17提取RNA时什么时候需要加入RNA载体?220
18如何除去纯化的RNA中微量的基因组DNA?220
19纯化的RNA样品如何保存？220
20组织和细胞样品如何收集和保存？220
21如何估计RNA的产量？220
22RNA制备过程中哪个环节要特别注意？221
23RTPCR要求模板RNA的260nm/280nm的值最低为多少，如果太低是不是会影响结果？221
24RTPCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？221
25如何选择RTPCR的方法？221
26RTPCR的常用内标猹瞐ctin和GAPDH的使用是否有选择性，比如不同的细胞.不同的刺激？221
27如何确定PCR的线性期？222
28引物的特异退火温度怎样设定？是否可以根据GC和AT含量算出？
是否可以用引物报告单上的Tm值？222
29PCR时20霯体系中cDNA应加多少比较合适？MgCl2应加多少？
各个成分的量有无确定标准？20霯是指体积还是量?222
30PCR结果进行电泳，actin有，但无其他目的条带，有几种原因？是否与cDNA的量少有关？Mg2+太多是否会抑制Taq酶的活性？223
31RTPCR的引物如何设计？223
32如何确认RNA的质量？224
33RTPCR中的定量如何控制？225
34RTPCR的实验设计需注意哪些事项？225
35RTPCR结果可以代替蛋白表达的结果吗？226
36DNA残留是否会影响RTPCR？226
37RTPCR定量测定中产物长度是否有限制？226
38RTPCR中内参照的意义是什么？226
39RTPCR中应选择什么作为内参照？226
40RTPCR定量实验中的凝胶成像要注意什么？226
41提取RNA时沉淀RNA步骤要注意什么？227
42RNA的保存要注意什么？227
43从临床样品中提取RNA有哪些注意事项？227
44PCR基因诱变的意义是什么？227
45定点突变时，转化率低或仅能得到很少菌落怎么办？227
46怎么解决定点突变中低突变率的问题？228
47如何避免PCR定点诱变中出现的假阳性问题？228
48怎样控制PCR随机基因突变的突变率？228
49在随机突变PCR后，看不到目的DNA产物条带怎么办？228
50QFPCR实验中无CT值（信号）出现是什么原因?229
51QFPCR中CT值出现过晚是什么原因？229
52QFPCR中标准曲线的线性关系不佳是什么原因?229
53QFPCR中阴性对照也出现明显的扩增是什么原因?230
54QFPCR中熔解曲线不止一个主峰是什么原因?230
55QFPCR中扩增效率低是什么原因?230
56QFPCR中实验重复性不好是什么原因?230
57如何知道QFPCR中变性温度是否合适?230
58QFPCR中如何选择变性时间?230
59QFPCR中如何知道退火温度和时间是否合适?231
60QFPCR中应该在哪一步读取荧光信号?231
61与常规的5′RACE相比，RMLRACE有什么特点?231
62IPCR的主要用途是什么?231
63PCRSSCP实验中有哪些注意事项？232
64如何优化多重PCR反应？233
65原位PCR要注意哪些问题？234
66PCR测序实验要注意哪些事项？236
67MSP与常规PCR有何不同？236
68为何有些组织DNA样品在MSP中同时出现甲基化和非甲基化两种结果？236
69MSP中如何设置对照？236
70采用软件设计的引物是否一定比自己根据经验设计的引物好？237

附录
附录1临床基因扩增检验实验室管理暂行办法241
附录2临床基因扩增检验实验室基本设置标准245
附录3临床基因扩增检验实验室工作规范247

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