生物实验室系列:冷泉港蛋白质组学实验手册

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作者: [美]
2012-09
版次: 1
ISBN: 9787122141217
定价: 68.00
装帧: 平装
开本: 16开
纸张: 胶版纸
页数: 194页
字数: 292千字
正文语种: 简体中文
分类: 自然科学
  •  《生物实验室系列:冷泉港蛋白质组学实验手册》为美国冷泉港实验室蛋白质组学课程培训用书,为蛋白质组学工作者案头必备实验手册。

     内容涉及各种蛋白质制备和分离方法、质谱分析的一般方法、用于蛋白质表达的编码序列的高通量克隆、蛋白质芯片的制备和使用以及验证这些数据的分析方法等内容。书中附有大量的以step-by-step形式展现的操作程序,针对关键性步骤增加说明性文字加以点拨,并有信息框阐述关键的知识点,具有很强的实用性和可操作性。

     《生物实验室系列:冷泉港蛋白质组学实验手册》适用于生物、医学基础和药学等专业研究生、高年级本科生和相关研究人员查阅参考。 简介1实验1全细胞裂解物的双向凝胶电泳和MALDI 质谱分析

    操作程序1.1酵母细胞裂解液的制备

    操作程序1.2IPG胶条的再水化和等电聚焦

    操作程序1.3等电聚焦胶条的平衡

    操作程序1.4第二向--SDS.PAGE

    操作程序1.5用SYPRO Ruby进行全蛋白染色

    操作程序1.6用Pro.Q Diamond进行磷酸化蛋白染色

    操作程序1.7用Pro.Q Emerald进行糖蛋白染色

    操作程序1.8用考马斯亮蓝进行全蛋白染色

    操作程序1.9用质谱兼容的银染进行全蛋白染色

    操作程序1.102D胶的图像分析和蛋白质回收

    操作程序1.11胶内酶切

    操作程序1.12MALDI点靶29实验2用于质谱分析的蛋白质复合物的纯化

    操作程序2.1培养并收集TAP标记的酵母细胞

    操作程序2.2为纯化TAP标记蛋白质复合物制备酵母细胞抽提物

    操作程序2.3第一步亲和富集--利用IgG亲和色谱从酵母抽提物中捕获TAP标记的蛋白质复合物

    操作程序2.4第二步亲和富集--TAP.标记的蛋白质复合物的钙调蛋白亲和色谱

    操作程序2.5与磁珠的结合

    操作程序2.6蛋白质复合物的亲和纯化

    实验3用MALDI TOF/TOF串联质谱进行肽的定性和定量分析

    操作程序3.1实验描述

    实验4蛋白质复合物分析--高灵敏液相色谱与串联质谱联用

    操作程序4.1HPLC柱毛细管的制作

    操作程序4.2填装微毛细管FSC柱

    操作程序4.3微毛细管RP.HPLC与ESI.质谱联用

    实验5用IMAC和质谱分析磷酸化肽

    操作程序5.1制备IMAC样品

    操作程序5.2制备IMAC柱和反相捕获柱(前柱)

    操作程序5.3制备IMAC柱

    操作程序5.4样品处理

    实验6全细胞裂解物的多维蛋白质鉴定技术分析

    操作程序6.1使用多维蛋白质鉴定技术分析全细胞裂解物

    实验7全细胞提取物的定量质谱检测技术(iTRAQ)

    操作程序7.1从酵母细胞制备肽

    操作程序7.2以iTRAQ试剂标记肽

    操作程序7.3应用反向色谱柱提纯肽

    操作程序7.4多肽等电聚焦95实验8串联质谱数据的分析及确认

    操作程序8.1使用Global Proteome Machine系统分析LC.MS/MS数据

    操作程序8.2使用ProteinPilot软件进行肽段和蛋白质鉴定

    操作程序8.3对数据库检索程序鉴定为能够匹配肽段序列的MS/MS谱图

    进行评价118实验9开放阅读框的高通量克隆--构建大量表达结构

    操作程序9.1利用Gateway LR反应构造表达结构

    操作程序9.2用Gateway LR反应产物化学转化感受态细菌

    实验10蛋白质微阵列的构建--核酸可编程性蛋白质阵列

    操作程序10.1用氨基甲硅烷包被载玻片

    操作程序10.2在96孔板中制备细菌的培养物

    操作程序10.3从96孔板中分离质粒DNA

    操作程序10.4DNA的生物素化、沉淀及样品布阵

    操作程序10.5NAPPA载玻片上蛋白质的表达

    操作程序10.6检测NAPPA载玻片上的蛋白质

    操作程序10.7在NAPPA芯片上测定DNA151

    实验11使用核酸可编程性蛋白质阵列鉴定蛋白质.蛋白质相互作用

    操作程序11.1NAPPA芯片与查询蛋白共表达

    操作程序11.2在NAPPA芯片上检测查询蛋白

    附录1钠升电喷雾电离离子源和串联质谱装置和示范

    附录2溶液内蛋白质的消化

    附录3凝胶内胰酶消化已分离蛋白

    附录4三氯乙酸蛋白质沉淀法

    附录5氨基酸的单同位素和亚铵离子分子量

    附录6氨基酸二肽分子量

    附录7LTQ离子阱的使用方法

    附录8肽段混合物离线去盐

    附录9感受态细胞的制备

    附录10DNA的定量

    附录11注意事项

    索引
  • 内容简介:
     《生物实验室系列:冷泉港蛋白质组学实验手册》为美国冷泉港实验室蛋白质组学课程培训用书,为蛋白质组学工作者案头必备实验手册。

     内容涉及各种蛋白质制备和分离方法、质谱分析的一般方法、用于蛋白质表达的编码序列的高通量克隆、蛋白质芯片的制备和使用以及验证这些数据的分析方法等内容。书中附有大量的以step-by-step形式展现的操作程序,针对关键性步骤增加说明性文字加以点拨,并有信息框阐述关键的知识点,具有很强的实用性和可操作性。

     《生物实验室系列:冷泉港蛋白质组学实验手册》适用于生物、医学基础和药学等专业研究生、高年级本科生和相关研究人员查阅参考。
  • 目录:
    简介1实验1全细胞裂解物的双向凝胶电泳和MALDI 质谱分析

    操作程序1.1酵母细胞裂解液的制备

    操作程序1.2IPG胶条的再水化和等电聚焦

    操作程序1.3等电聚焦胶条的平衡

    操作程序1.4第二向--SDS.PAGE

    操作程序1.5用SYPRO Ruby进行全蛋白染色

    操作程序1.6用Pro.Q Diamond进行磷酸化蛋白染色

    操作程序1.7用Pro.Q Emerald进行糖蛋白染色

    操作程序1.8用考马斯亮蓝进行全蛋白染色

    操作程序1.9用质谱兼容的银染进行全蛋白染色

    操作程序1.102D胶的图像分析和蛋白质回收

    操作程序1.11胶内酶切

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    操作程序2.2为纯化TAP标记蛋白质复合物制备酵母细胞抽提物

    操作程序2.3第一步亲和富集--利用IgG亲和色谱从酵母抽提物中捕获TAP标记的蛋白质复合物

    操作程序2.4第二步亲和富集--TAP.标记的蛋白质复合物的钙调蛋白亲和色谱

    操作程序2.5与磁珠的结合

    操作程序2.6蛋白质复合物的亲和纯化

    实验3用MALDI TOF/TOF串联质谱进行肽的定性和定量分析

    操作程序3.1实验描述

    实验4蛋白质复合物分析--高灵敏液相色谱与串联质谱联用

    操作程序4.1HPLC柱毛细管的制作

    操作程序4.2填装微毛细管FSC柱

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    实验5用IMAC和质谱分析磷酸化肽

    操作程序5.1制备IMAC样品

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    操作程序5.3制备IMAC柱

    操作程序5.4样品处理

    实验6全细胞裂解物的多维蛋白质鉴定技术分析

    操作程序6.1使用多维蛋白质鉴定技术分析全细胞裂解物

    实验7全细胞提取物的定量质谱检测技术(iTRAQ)

    操作程序7.1从酵母细胞制备肽

    操作程序7.2以iTRAQ试剂标记肽

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    操作程序8.1使用Global Proteome Machine系统分析LC.MS/MS数据

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    操作程序8.3对数据库检索程序鉴定为能够匹配肽段序列的MS/MS谱图

    进行评价118实验9开放阅读框的高通量克隆--构建大量表达结构

    操作程序9.1利用Gateway LR反应构造表达结构

    操作程序9.2用Gateway LR反应产物化学转化感受态细菌

    实验10蛋白质微阵列的构建--核酸可编程性蛋白质阵列

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    操作程序10.2在96孔板中制备细菌的培养物

    操作程序10.3从96孔板中分离质粒DNA

    操作程序10.4DNA的生物素化、沉淀及样品布阵

    操作程序10.5NAPPA载玻片上蛋白质的表达

    操作程序10.6检测NAPPA载玻片上的蛋白质

    操作程序10.7在NAPPA芯片上测定DNA151

    实验11使用核酸可编程性蛋白质阵列鉴定蛋白质.蛋白质相互作用

    操作程序11.1NAPPA芯片与查询蛋白共表达

    操作程序11.2在NAPPA芯片上检测查询蛋白

    附录1钠升电喷雾电离离子源和串联质谱装置和示范

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    附录3凝胶内胰酶消化已分离蛋白

    附录4三氯乙酸蛋白质沉淀法

    附录5氨基酸的单同位素和亚铵离子分子量

    附录6氨基酸二肽分子量

    附录7LTQ离子阱的使用方法

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