蛋白质组学中的蛋白质纯化手册

蛋白质组学中的蛋白质纯化手册

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作者: [澳] 辛普森（Simpson R.J）编 , 茹炳根译

出版社: 化学工业出版社

出版时间: 2009-03

版次: 1

ISBN: 9787122018335

定价: 186.00

装帧: 平装

开本: 16开

纸张: 胶版纸

页数: 734页

字数: 1077千字

正文语种: 简体中文

丛书: 生物实验室系列

分类: 自然科学

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　　蛋白质组学这一领域刚开始趋于成熟，而开展蛋白质组学研究首先要把蛋白质从复杂的大分子混合物中分离纯化出来。为此，需要经过验证并值得信赖的蛋白质分离纯化方案以用于蛋白质组学研究。
　　原著“PurifyingProteinsforProteomics：ALaboratoryManual”由国际权威专家RichardJ．Simpson联合全球知名的专业实验室共同撰写，著名的美国冷泉港实验室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)推出，是《蛋白质与蛋白质组学实验指南》的姐妹篇。
　　以蛋白质组学中的蛋白质纯化为核心。《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》的主要内容有：
　　★蛋白质纯化和蛋白质组学的各种实用技术。包括专门用于蛋白质组学研究的制备技术、色谱方法和电泳技术，用于结构蛋白质组学研究的蛋白质纯化分析技术等
　　★上述各种技术方法的背景资料、理论、实验方案、疑难解答以及相关的支持性信息和参考资料
　　《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》尽可能完全地罗列了各种实验方案，可供不同规模实验室的研究者选择应用。在介绍每一个实验方案时，以“step-by-step”操作指南的形式逐步展开，详细列出实验仪器、试剂及操作步骤，并针对常见问题给出经验性的提示或解决方案。
　　毫无疑问，对于蛋白质化学、生物化学的研究人员在蛋白质组学这一新兴领域寻求最新的技术方法，《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》是一部必备的实验指南。而对于遗传学、细胞生物学、分子生物学研究人员开展表型和细胞功能研究，以及医学和生物工程领域开展蛋白质相关研究，《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》也是基本的实验工具书。第1部分：供蛋白质组学分析的蛋白样品制备
第1章分离科学在蛋白质组学中的作用
1.1制备纯化蛋白：蛋白质微阵和结构蛋白质组学的瓶颈
1.2以质谱为基础的蛋白质鉴定
1.3蛋白质组学所面临的一个关键技术的挑战：减少样品的复杂性
1.4本书的概述
参考文献
选读文献
网络资源

第2章蛋白质的纯化策略
2.1挑战
2.2蛋白质的量和纯度要求
2.3重组蛋白通常能简化纯化过程
2.4可根据蛋白质的内在特性来分离蛋白质
2.5设计蛋白质纯化方案
2.6应用：膜相关抗原A33的纯化
参考文献
选读文献

第Ⅱ部分：蛋白质组学中制备蛋白样品的色谱方法
第3章蛋白质和肽纯化的色谱方法导论
3.1基本概念
3.2色谱·眭能
实验方案
方案1轻拍一填装法干式填装刚性固体柱
色谱术语表
参考文献
选读文献
网络资源

第4章全蛋白的多维色谱
4.1MDLC用于蛋白质分级分离的目的
4.2策略
4.3主要文献概述
4.4MDLc的理论参数
4.5色谱模式：正交性与相容性
4.6与其他技术的性能比较
4.7MDLC的常见问题
4.8发展潜力
4.9样品处理方案：SEC／反相色谱法分离大肠杆菌蛋白
4.10研究实例：MDLC分析酵母蛋白提取物
4.11结论
参考文献

第5章可溶性重组蛋白的高通量筛选
5.1引言
实验方案
方案1设计平行克隆表达载体
方案2平行克隆所用载体的制备
方案3黏末端PcR产物的制备和消化载体的连接
方案4把DNA转化到细菌中
方案5诱导和筛选可溶性融合蛋白
参考文献

第6章离子交换色谱
6.1IEC利用了分子间的静电力
6.2几种IEC的模式
6.3IEC中缓冲液的选择很重要
6.4离子交换介质和色谱分离装置
实验方案
方案1离子交换柱的选择
方案2离子交换柱的制备
方案3用IEC分离蛋白质
IEC柱的清洗
IEC的优化和常见问题
参考文献
网络资源
离子交换介质的供应商

第7章尺寸排阻色谱
7.1小分子更易进入凝胶介质间的空隙
7.2分配系数Kd和有效分配系数K描述了溶质在特定凝胶中的洗脱情况
7.3SEC分离相似形状分子的能力取决于凝胶的选择范围
7.4分子的形状对其洗脱时间的影响
7.5影响洗脱蛋白分辨率的因素
7.6SEC在纯化方案中的作用
7.7SEC中缓冲液、溶液和试剂的配制
7.8SEC中蛋白样品和肽样品的预处理
7.9SEC液相色谱装置
7.10利用SEC分离纯化的例子
实验方案
方案1尺寸排阻色谱柱的填装
方案2尺寸排阻色谱的制备
附加方案：分析性尺寸排阻色谱
方案3用尺寸排阻色谱进行蛋白质的脱盐和缓冲液的更换
柱的清洗和保养操作
关于SEC的常见问题
参考文献

第8章反相高效液相色谱在蛋白质分离和纯化中的应用
8.1：RP-HPLC的特点与机制
8.2分离机制
8.3RP-HPLC基于“疏水脚”的细微差异分离多肽
8.4RP-HPLC柱的特点与操作
8.5流动相
8.6温度
8.7表面活性剂对反相分离的影响
8.8在质谱鉴定前用RP-HPLC分级分离多肽
8.9RP.HPLC常见问题指南
实验方案
方案1RPHPLC分离蛋白质的标准色谱条件
方案2RP-HPLC分离多肽的标准色谱条件
参考文献
选读文献
网络资源

第9章疏水相互作用色谱
9.1HIC与RP-HPLC的区别
9.2HIC的基本原理
9.3实验的影响因素
实验方案
方案1用HIC分离蛋白质
参考文献

第10章亲和色谱与免疫亲和色谱
10.1亲和色谱的实际应用
10.2凝集素亲和色谱
10.3配基亲和色谱
10.4免疫亲和色谱
10.5DNA亲和色谱
10.6共价色谱
10.7采用巯基一二硫键互换反应的共价色谱
实验方案
方案1凝集素一琼脂糖凝胶亲和色谱
方案2蛋白质配基亲和色谱
方案3制备抗体亲和树脂过程中抗体的定位
方案4DNA亲和柱的制备
方案5DNA亲和色谱
方案6从仅被混有不可逆失活的亚磺酸氧化产物中以可逆失活混合的二硫化物形式纯化木瓜蛋白酶
方案7以琼脂糖一谷胱甘肽一2一吡啶二硫化物凝胶作为填料的共价色谱
方案8使用活化的Thiopropyl一Sepharose6B凝胶的共价色谱
参考文献
网络资源

第11章蛋白质组学研究中的染料配基亲和色谱
11.1方法的设计和优化
11.2染料配基吸附剂的再生和储存
实验方案
方案1染料在多羟基介质中的固定化
附加方案：固定化配基浓度的测定
方案2通过结合目的蛋白的能力来筛选固定化染料
方案3吸附条件的优化
方案4洗脱条件的优化
方案5分批式试管法计算吸附剂的有效容量
方案6用染料配基亲和色谱纯化蛋白
11.3研究实例：使用CibacronBlue3GA-Sepharose亲和吸附剂纯化重组甲酸脱氢酶
参考文献

第12章固定化金属离子亲和色谱
12.1IMAC的基本原理
12.2IMAC的基本操作
12.3IMAC最常用于纯化带多聚组氨酸标签的蛋白质
12.4目的蛋白性质未知时可使用IMA
12.5磷蛋白和磷酸肽的分离
实验方案
方案1IMAC预装柱的准备
第13章用羟磷灰石进行蛋白质色谱
第14章色谱聚焦

第Ⅲ部分：蛋白质组学中制备蛋白样品的电泳方法
第15章电泳分离蛋白质策略导论
第16章双向凝胶电泳分离蛋白质
第17章在MCE中通过等电位分段法进行高分辨率双向凝胶电泳来制备样品
第18章一种电泳纯化蛋白质的方法：GradiflowBF400仪
第19章用自由流动电泳技术纯化蛋白质

第Ⅳ部分：用于结构蛋白质组学的纯化蛋白的分析
第20章已纯化蛋白质鉴定方法导论
第21章用质谱测定蛋白质的特性
第22章分析超速离心：蛋白质大小、构象和相互作用
第23章蛋白质构象稳定性的测定
第24章表面等离子体共振与质谱联用：鉴定结合配体及描述相互作用
第25章糖蛋白中糖的分析

附录1蛋白质结构概述
附录2蛋白质浓度的测定
附录3蛋白质溶液的浓缩
附录4蛋白质的储存稳定性
附录5单向聚丙烯酰胺凝胶电泳
附录6疑难问题解决指南
附录7注意事项
索引
内容简介:
　　蛋白质组学这一领域刚开始趋于成熟，而开展蛋白质组学研究首先要把蛋白质从复杂的大分子混合物中分离纯化出来。为此，需要经过验证并值得信赖的蛋白质分离纯化方案以用于蛋白质组学研究。
　　原著“PurifyingProteinsforProteomics：ALaboratoryManual”由国际权威专家RichardJ．Simpson联合全球知名的专业实验室共同撰写，著名的美国冷泉港实验室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)推出，是《蛋白质与蛋白质组学实验指南》的姐妹篇。
　　以蛋白质组学中的蛋白质纯化为核心。《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》的主要内容有：
　　★蛋白质纯化和蛋白质组学的各种实用技术。包括专门用于蛋白质组学研究的制备技术、色谱方法和电泳技术，用于结构蛋白质组学研究的蛋白质纯化分析技术等
　　★上述各种技术方法的背景资料、理论、实验方案、疑难解答以及相关的支持性信息和参考资料
　　《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》尽可能完全地罗列了各种实验方案，可供不同规模实验室的研究者选择应用。在介绍每一个实验方案时，以“step-by-step”操作指南的形式逐步展开，详细列出实验仪器、试剂及操作步骤，并针对常见问题给出经验性的提示或解决方案。
　　毫无疑问，对于蛋白质化学、生物化学的研究人员在蛋白质组学这一新兴领域寻求最新的技术方法，《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》是一部必备的实验指南。而对于遗传学、细胞生物学、分子生物学研究人员开展表型和细胞功能研究，以及医学和生物工程领域开展蛋白质相关研究，《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》也是基本的实验工具书。
目录:
第1部分：供蛋白质组学分析的蛋白样品制备
第1章分离科学在蛋白质组学中的作用
1.1制备纯化蛋白：蛋白质微阵和结构蛋白质组学的瓶颈
1.2以质谱为基础的蛋白质鉴定
1.3蛋白质组学所面临的一个关键技术的挑战：减少样品的复杂性
1.4本书的概述
参考文献
选读文献
网络资源

第2章蛋白质的纯化策略
2.1挑战
2.2蛋白质的量和纯度要求
2.3重组蛋白通常能简化纯化过程
2.4可根据蛋白质的内在特性来分离蛋白质
2.5设计蛋白质纯化方案
2.6应用：膜相关抗原A33的纯化
参考文献
选读文献

第Ⅱ部分：蛋白质组学中制备蛋白样品的色谱方法
第3章蛋白质和肽纯化的色谱方法导论
3.1基本概念
3.2色谱·眭能
实验方案
方案1轻拍一填装法干式填装刚性固体柱
色谱术语表
参考文献
选读文献
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第4章全蛋白的多维色谱
4.1MDLC用于蛋白质分级分离的目的
4.2策略
4.3主要文献概述
4.4MDLc的理论参数
4.5色谱模式：正交性与相容性
4.6与其他技术的性能比较
4.7MDLC的常见问题
4.8发展潜力
4.9样品处理方案：SEC／反相色谱法分离大肠杆菌蛋白
4.10研究实例：MDLC分析酵母蛋白提取物
4.11结论
参考文献

第5章可溶性重组蛋白的高通量筛选
5.1引言
实验方案
方案1设计平行克隆表达载体
方案2平行克隆所用载体的制备
方案3黏末端PcR产物的制备和消化载体的连接
方案4把DNA转化到细菌中
方案5诱导和筛选可溶性融合蛋白
参考文献

第6章离子交换色谱
6.1IEC利用了分子间的静电力
6.2几种IEC的模式
6.3IEC中缓冲液的选择很重要
6.4离子交换介质和色谱分离装置
实验方案
方案1离子交换柱的选择
方案2离子交换柱的制备
方案3用IEC分离蛋白质
IEC柱的清洗
IEC的优化和常见问题
参考文献
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离子交换介质的供应商

第7章尺寸排阻色谱
7.1小分子更易进入凝胶介质间的空隙
7.2分配系数Kd和有效分配系数K描述了溶质在特定凝胶中的洗脱情况
7.3SEC分离相似形状分子的能力取决于凝胶的选择范围
7.4分子的形状对其洗脱时间的影响
7.5影响洗脱蛋白分辨率的因素
7.6SEC在纯化方案中的作用
7.7SEC中缓冲液、溶液和试剂的配制
7.8SEC中蛋白样品和肽样品的预处理
7.9SEC液相色谱装置
7.10利用SEC分离纯化的例子
实验方案
方案1尺寸排阻色谱柱的填装
方案2尺寸排阻色谱的制备
附加方案：分析性尺寸排阻色谱
方案3用尺寸排阻色谱进行蛋白质的脱盐和缓冲液的更换
柱的清洗和保养操作
关于SEC的常见问题
参考文献

第8章反相高效液相色谱在蛋白质分离和纯化中的应用
8.1：RP-HPLC的特点与机制
8.2分离机制
8.3RP-HPLC基于“疏水脚”的细微差异分离多肽
8.4RP-HPLC柱的特点与操作
8.5流动相
8.6温度
8.7表面活性剂对反相分离的影响
8.8在质谱鉴定前用RP-HPLC分级分离多肽
8.9RP.HPLC常见问题指南
实验方案
方案1RPHPLC分离蛋白质的标准色谱条件
方案2RP-HPLC分离多肽的标准色谱条件
参考文献
选读文献
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第9章疏水相互作用色谱
9.1HIC与RP-HPLC的区别
9.2HIC的基本原理
9.3实验的影响因素
实验方案
方案1用HIC分离蛋白质
参考文献

第10章亲和色谱与免疫亲和色谱
10.1亲和色谱的实际应用
10.2凝集素亲和色谱
10.3配基亲和色谱
10.4免疫亲和色谱
10.5DNA亲和色谱
10.6共价色谱
10.7采用巯基一二硫键互换反应的共价色谱
实验方案
方案1凝集素一琼脂糖凝胶亲和色谱
方案2蛋白质配基亲和色谱
方案3制备抗体亲和树脂过程中抗体的定位
方案4DNA亲和柱的制备
方案5DNA亲和色谱
方案6从仅被混有不可逆失活的亚磺酸氧化产物中以可逆失活混合的二硫化物形式纯化木瓜蛋白酶
方案7以琼脂糖一谷胱甘肽一2一吡啶二硫化物凝胶作为填料的共价色谱
方案8使用活化的Thiopropyl一Sepharose6B凝胶的共价色谱
参考文献
网络资源

第11章蛋白质组学研究中的染料配基亲和色谱
11.1方法的设计和优化
11.2染料配基吸附剂的再生和储存
实验方案
方案1染料在多羟基介质中的固定化
附加方案：固定化配基浓度的测定
方案2通过结合目的蛋白的能力来筛选固定化染料
方案3吸附条件的优化
方案4洗脱条件的优化
方案5分批式试管法计算吸附剂的有效容量
方案6用染料配基亲和色谱纯化蛋白
11.3研究实例：使用CibacronBlue3GA-Sepharose亲和吸附剂纯化重组甲酸脱氢酶
参考文献

第12章固定化金属离子亲和色谱
12.1IMAC的基本原理
12.2IMAC的基本操作
12.3IMAC最常用于纯化带多聚组氨酸标签的蛋白质
12.4目的蛋白性质未知时可使用IMA
12.5磷蛋白和磷酸肽的分离
实验方案
方案1IMAC预装柱的准备
第13章用羟磷灰石进行蛋白质色谱
第14章色谱聚焦

第Ⅲ部分：蛋白质组学中制备蛋白样品的电泳方法
第15章电泳分离蛋白质策略导论
第16章双向凝胶电泳分离蛋白质
第17章在MCE中通过等电位分段法进行高分辨率双向凝胶电泳来制备样品
第18章一种电泳纯化蛋白质的方法：GradiflowBF400仪
第19章用自由流动电泳技术纯化蛋白质

第Ⅳ部分：用于结构蛋白质组学的纯化蛋白的分析
第20章已纯化蛋白质鉴定方法导论
第21章用质谱测定蛋白质的特性
第22章分析超速离心：蛋白质大小、构象和相互作用
第23章蛋白质构象稳定性的测定
第24章表面等离子体共振与质谱联用：鉴定结合配体及描述相互作用
第25章糖蛋白中糖的分析

附录1蛋白质结构概述
附录2蛋白质浓度的测定
附录3蛋白质溶液的浓缩
附录4蛋白质的储存稳定性
附录5单向聚丙烯酰胺凝胶电泳
附录6疑难问题解决指南
附录7注意事项
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